[자연과학] 실험보고서 - 해양 미생물 DNA를 이용한 PCR 전기영동 실험
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작성일 20-05-07 22:08
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[자연과학] 실험보고서 - 해양 미생물 DNA를 이용한 PCR 전기영동 실험
설명
1. Introduction
1)PCR
PCR 이란 DNA의 원하는 부분 (target sequence)을 증폭하는 방법이다. Primer은 각각 target sequence에 따라 달라진다(상응하는 DNA 염기서열이 다르다) primer에 따라 온도와 시간이 달라진다.
2단계[annealing]- 약 60도 정도에서 30초 정도 진행된다 분리된 DNA가닥에 primer이 결합되는 과정이다.
PCR buffer-Taq polymerase가 잘 활성화 될 수 있도록 도와주는 이온
2)전기영동
DNA를 크기에 따라 분리하는 방법이다. Primer은 각각 target sequence에 따라 달라진다(상응하는 DNA 염기서열이 다르다) primer에 따라 온도와 시간이 달라진다.
pcr 구성요소
primer-PCR의 가장 중요한 요소로써 정확도를 결정한다.
denaturation, annealing, extension 3가지 과정으로 구성되어 있고
이 과정이(circle) 반복 되면서 DNA가 증폭된다
PCR 과정
1단계[denaturation]-약 95도 정도에서 1~2분 정도 진행된다 온도가 높아지면서 DNA사이에 있는 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 DNA가 두가닥으로 나눠진다.
전기영동 구성요소
Agarose gel-투명하고 사용이 간편하며 DNA측정(測定) 에 적합하다
TAE buffer-pH를 안정화 시키는 완충용액으로 전기영동 시 DNA를 이동시키는 운반체들이 이온이고 이런 이온을 buffer가 공급해준다. DNA는 phostphate group에서 음전하를 띄기 때문에 두 전극 사이에서 있을 때 양 전극으로 이동한다.
dNTP(GATC solution 용액)-중합효소의 양을 늘려준다.
2단계[annealing]- 약 60도 정도에서 30초 정도 진행된다 분리된 DNA가닥에 primer이 결합되는 과정이다.
3단계[extension]- 약 72도에서 2분정도 진행된다 taq polymerase가 합성되어 primer에서 D...
1. Introduction
1)PCR
PCR 이란 DNA의 원하는 부분 (target sequence)을 증폭하는 방법이다.
denaturation, annealing, extension 3가지 과정으로 구성되어 있고
이 과정이(circle) 반복 되면서 DNA가 증폭된다
PCR 과정
1단계[denaturation]-약 95도 정도에서 1~2분 정도 진행된다 온도가 높아지면서 DNA사이에 있는 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 DNA가 두가닥으로 나눠진다.
safe shi…(省略)
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다.
3단계[extension]- 약 72도에서 2분정도 진행된다 taq polymerase가 합성되어 primer에서 DNA가 뻗어나간다. primer이 길경우
taq polymerase-바다 밑 뜨거운 곳에 사는 생명체로부터 추출한 효소로써 열 저항성이 높아 95도 까지 올라가는 extenstion 과정에서 이용되기에 적합하다.